人血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA试剂盒应用方法

产品名称：人血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA试剂盒
英文名称： human ANG-R-Tie2 ELISA kit
规    格：48T/96T，可以提供定量和定性。
本试剂盒仅供科研实验使用！

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ANG-R-Tie2抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ANG-R-Tie2与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ANG-R-Tie2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ANG-R-Tie2抗体与结合在包被抗体上的人ANG-R-Tie2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人ANG-R-Tie2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人ANG-R-Tie2的浓度。

试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（8μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
4μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
2μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
1μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
0.5μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
0.25μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15 钟以内进行。