试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品:400pmol/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素标记的抗TGF-β2 抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按说明书进行稀释
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
标本稀释液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型鼠淋巴细胞趋化因子
小鼠ELISA试剂盒实验意事项
1.血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。
2.在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
3.吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
4.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶,如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。1.5 吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
5.液体全部加入酶标孔后,将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
6.孵育时要使盖板膜封好酶标板,防止水分蒸发,以防曲线不成线性。
7.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只要取出所需量。
8.由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色
9.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
10.检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
11.底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
12.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。