MT0058 热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶

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特别提示：包括热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶
英文名称：Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase
产品货号：MT0058
产品规格：10T|100T

5"App DNA/RNA热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌（Methanobacterium thermoautotrophicum），是RNA连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该热稳定DNA/RNA连接酶催化的连接反应不依赖于ATP，但需要5’预腺苷化的接头才能将其连接到RNA或单链DNA的3’OH末端。该酶也可催化3’端被2’-O-甲基化的RNA和5’预腺苷化接头的连接反应。连接反应的zuì适反应温度为 60～65℃。即使在ATP存在的情况下，该连接酶也不能使RNA或单链DNA的5’端磷酸发生腺苷化，因此降低非特异性的串联和环化。该酶为热稳定型，zuì佳反应温度为 65℃，此温度下降低了RNA的二级结构，大大提高连接效率。


产品组成：

组分	10T
Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase(20pmol/μl)	20μl
10×App DNA/RNA Ligase Buffer	100μl
50 mM MnCl2	100μl

储存条件：-20℃可保存3年。

产品应用：
·二代测序文库构建中连接单链DNA和腺苷化的DNA接头。
·构建小RNA二代测序文库，可在较高温度下连接预腺苷化的接头和RNA。

注意事项：
1．1× AppDNA/RNA Ligase Buffer：10mM Bis-Tris-Propane- HCl pH 7.0,10mM MgCl₂,1mM DTT。
2．该酶只能连接5’-端预腺苷化的Oligo接头到单链DNA或RNA的3’-OH基团。
3．当腺苷化底物的5’-端个碱基为“C”时，连接效率较差。


使用方法：

1．配制如下反应体系
  ssDNA/RNA Substrate－－－－－－－－－－－－20 pmol
  5"App DNA Oligonucleotide－－－－－－－－－40 pmol
  10× AppDNA/RNA Ligase Buffer－－－－－－－2μl
  50 mM MnCl2（for ssDNA ligation only)－－－2μl
  Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase－－－－－2μl
  ddH2O Up to 20 ul
2．65℃ 孵育 1h。
3．95℃ 3min，终止反应。

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