BTN70901 柱式真菌DNA提取试剂盒说明书

柱式真菌DNA提取试剂盒说明书

产品编号：BTN70901

规格：50T

产品及特点：

本产品是真菌DNAout 的柱式升级产品，能够破裂各种真菌坚硬的外壳，同时使用硅胶膜DNA 纯化技术，得到的DNA 适用于各种后续实验。

1. DNA 纯净，OD260/280 一般都在1.9 左右、DNA 片段大小在30-50 Kb 左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。

2. 操作简单，整个过程约15分钟，比大多数同类产品短。

3. 安全，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。

4. 液体培养物处理量在0.1-3mL之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5g之间。

5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格。

规格及成分：

保存条件：

常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂：

氯fang。

使用方法：

1. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3 mL 液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。

注意：zui好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量zui好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份，具体方法请参考相关文献和相关产品的使用说明书，如红细胞裂解液)。

2. 在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀（如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用）。

3. 65℃保温5-30分钟，其间zui好吹打混匀2-3次。

4. 12000-15000 g 室温离心3分钟。

5. 将不超过0.75 mL 的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。

6. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。

7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。

8. 12000-15000 g 室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。

9. 加入0.2 mL 的氯fang(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。

10. 12000-15000 g 室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL 塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5 倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。

11. 加入1.5 倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。

12. 每次转移0.7-0.8 mL 混合液后，室温放置5-10分钟。

13. 12000-15000 g 室温1分钟，弃穿透液。

14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。

15. 将0.7 mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。

16. 在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000g离心半分钟（此步为第二次洗涤）。

17. 空甩1分钟去除残留液体。

18. 将离心柱放置在一新的1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100μL通用洗脱液。

19. 室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为真菌DNA 溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。

20. 可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。