BTN70903 一步法质粒DNA提取试剂盒2.0说明书

一步法质粒DNA提取试剂盒2.0说明书

产品编号：BTN70903

规格：50T/100T

产品及特点：

基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中zui常用的方法之一，其操作包括三种溶液处理，一般需要30 分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒DNA 初提液。本产品采用百奥莱博开发的一步式细菌裂解技术，只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。本产品的主要特点是:

1. 一步式裂解细菌，比传统的碱变性方法更快捷。

2. 产量跟经典碱变性法相当或更高，产率一般为3-5 μg 质粒DNA/mL 饱和菌液（对高拷贝质粒而言）。

3. DNA 纯度高，OD260/280 一般在1.8 左右，基因组DNA 和RNA 污染少。

4. 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等实验。

5. 重复性和稳定性好。

格及成分：

保存条件：

常温运输及保存（溶液A需要4℃保存），有效期一年。

使用方法：

1. 用塑料离心管收集不超过3 mL 过夜培养饱和菌液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃上清。注意:不能超过3 mL 菌液，否则质粒回收率将急剧降低。

2. 加入 0.6-1 mL 溶液A(用前需摇匀)，充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清，一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法，故可以充分吹打。

3. 将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2 分钟使质粒DNA 与膜结合。室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。如果一次不能将上清全部转移到离心吸附柱中，可以分两次进行。

4. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。

5. 再在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此步预洗zui好别省略，否则DNA 纯度不高。

6. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

7. 再在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。

8. 再在离心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，zui后得到的质粒DNA 的OD260 和280 的比值达不到1.8。

9. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA 沉不到加样孔里去）和酶反应。

10. 将离心柱置于一个新的1.5 mL 自备塑料离心管中，加入30-100 μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2 分钟。如果将DNA 洗脱液2.0 预热到65-80℃，则效果更好。

11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，离心管底溶液即质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。

注意：如果需要去除DNA 样品中的内毒素，请使用百奥莱博的液相内毒素清除剂。