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免疫组化实验流程有哪些？
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详细介绍
免疫组化实验流程有哪些？
A. 免疫组化石蜡片操作过程：
1.取材固定：取新鲜组织，洗去血渍，剔除结缔组织后 4%多聚甲醛（AR1068）
固定，时间视组织大小及厚度而定。
2. 切片及烤片：使用 APES（AR0001）或多聚赖氨酸（AR0003）处理的防脱玻片
（AR1065 或 AR1066）捞取切片。捞片后立即置烤箱 37 ℃5-6 小时以使切片
紧密粘附。
3. 组织切片常规脱蜡至水：依次 80%，90%，二甲苯及乙醇各 5-7 分钟，
然后水洗。
4. 灭活：将切片置于 3%H2O2 （AR1108），室温 5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸
馏水洗 3 次。
5． 热修复抗原:将切片浸入 0.01M 枸橼酸盐缓冲液（AR0024，PH6.0）或 0.02M
PBS（AR0030，PH7.2-7.6）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔 5-10 分
钟后，反复 1-2 次。自然冷却至室温。
酶修复抗原：消化酶（AR0022）处理组织，时间视消化酶浓度而定。
6. 滴加 5%BSA 封闭液（AR0004）, 37℃30 分钟。甩去多余液体, 不洗。
7．滴加稀释的一抗， 4℃过夜或 37℃2 小时。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分钟×3 次。
8．滴加相应的二抗, 37℃ 30 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分钟×3 次。
9．滴加 SABC,37℃ 30 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分钟×4 次。
10．DAB 显色:使用 DAB 显色试剂盒(AR1022)。取 1ml 蒸馏水,加试剂盒中 A,B,C
试剂各 1 滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在 15 分钟
之间。蒸馏水洗涤。
11．苏木素（AR0005）轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
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