HR7814 冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒

在激发波长500nm，发射波长525 nm 附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光，从而测定组织内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。

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冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒

 

产品编号：HR7814

产品组成：

保存条件：

DCFHDA探针-20℃避光保存；清洗液2-8℃保存。有效期6个月。

【注】：

● 探针开盖前4℃/-20℃避光保存。长期不用可以-20℃保存，避免反复冻融。

● 荧光探针为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁，注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒产品简介：

活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括过氧化氢（H₂O₂，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)。超氧阴离子遇水生成H2O2，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。

冰冻切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFHDA进行活性氧检测的试剂盒。DCFHDA本身没有荧光，被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与活性氧水平成正比，检测绿色荧光就可以知道组织内活性氧的水平。

在激发波长500nm，发射波长525 nm 附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光，从而测定组织内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。

切片样本的活性氧检测一般最好使用振动切片或者新鲜的冰冻切片样本。石蜡切片样本的ROS在切片的的制作过程中会损失掉，有条件的话就使用振动切片或者冰冻切片样本，一般不建议使用石蜡切片样本。有条件的话也可以采用直接用组织样本检测，使用不需要制备成切片的ROS检测试剂盒。

产品特点：

● 使用方便：可用荧光显微镜直接观察；

● 背景低，灵敏度高；

● 线性范围宽，使用方便。

检测方法：

● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦显微镜

样本类型：

● 新鲜冰冻切片 ● 振动切片

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS

冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● 对于某些样本，如果荧光太强，可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。

● 以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。

使用方法：

一、试剂配制

1、根据样本数，用纯水将DCFHDA活性氧荧光探针200-1000倍稀释，配成染色工作液。

【注】：

● 不同样本的活性氧差异较大，需要根据预实验结果调整稀释倍数。一般染色终浓度按试剂盒中探针母液的200-1000倍稀释，最大可至10000倍稀释，1000倍稀释适合大多数样本。

2、用纯水将10×清洗液10倍稀释，配成1×清洗液工作液。

二、探针标记

1、准备待测的厚为10-20μm的未经固定处理的冰冻切片。

【注】：

● 必须使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片/振动切片。

● 否则不新鲜的样本可能ROS已经流失，检测不到活性氧。

● 非新鲜样本残余的ROS也可以检测到。

2、室温下，小心加上200μL清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置5-10分钟。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。

【注】：

● 最好在湿盒中孵育，避免液体蒸发。

5、移除染色液。

6、用PBS洗涤切片2-3次。

7、加盖玻片或甘油封片。

8、荧光显微镜检测。

【注】：

● 染色完成后，立即进行荧光定性分析。

● 激发波长488nm，发射波长525nm。

● 荧光强，表明活性氧（ROS）含量高。

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