HR0119 高脂肪样本蛋白提取试剂盒

高脂肪样本蛋白提取试剂盒适用于从各种脂肪含量高的细胞和实体组织，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。

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高脂肪样本蛋白提取试剂盒

 

产品编号：HR0119

产品组成：

储存条件：

蛋白提取液2-8℃保存；离心柱室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

● 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

产品简介：

高脂肪样本蛋白提取试剂盒适用于从各种脂肪含量高的细胞和实体组织，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

本试剂盒所配离心柱用来滤除颗粒较大的固体杂质和固态脂肪杂质，不能完全滤除液态脂滴，如果离心过滤后液面有脂肪层，需要用移液器移除液面的脂肪层。需要一次性完全滤除所有液态脂肪请选用我公司其他货号的试剂盒。

产品特点：

● 使用方便，从细胞/组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

● 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 移液器 ● 离心机 ● 涡旋混匀器 ● 振荡器 ● PBS

高脂肪样本蛋白提取试剂盒注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、TubμLin。

使用方法：

细胞蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。

2、取5-10×10⁶个细胞，在4℃，2000×g条件离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3、用冷 PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4、每 5×10⁶个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

【注】：

● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

5、套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。

● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。

● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

6、将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

7、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2、取100mg-200mg组织样本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机充分匀浆。

【注】：

● 如果组织样品很细小，可剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。

● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。

3、将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-30分钟。

【注】：

● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

4、套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。

● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。

● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

5、将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

6、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

7、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

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