MT0013 MLV逆转录酶

MLV逆转录酶的品牌是百奥莱博，是优质的工具酶产品，本制品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要MLV逆转录酶等工具酶产品的客户，请到我公司官网联系我们。

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特别提示：包括MLV逆转录酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：MLV逆转录酶
英文名称：MLV Reverse Transcriptase
产品货号：MT0013
产品规格：10KU|50KU

MLV逆转录酶是我司在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶，可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应，采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，因此能更好地提高后续检测的灵敏度。此外，MLV反转录酶通过定点突变去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强。



产品组成：

组分	MT0013-10000U	MT0013-50000U
MLV逆转录酶(200U/μl)	50μl	250μl
10×RT Buffer	500μl	1ml×2

储存：-20℃可保存2年。

单位定义：以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化1nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。

操作方法：

1．按以下组分配制反应体系：

加入物	加入量
MLV Reverse Transcriptase	0.5-1μl
10×RT Buffer	2μl
dNTP Mixture（10 mM each)	1μl
Total RNA or Poly(A) RNA	0.1-2μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer *	1μl
RNase Inhibitor（40 U/μl)	0.5μl
RNase-Free H2O	Up to 20μl

*注：Oligo dT(25) 使用浓度为 20～50μM, 如使用Random9随机引物可使用125μM，基因特异性引物可使用5μM。

2．在PCR 仪上按下列条件进行反转录反应：
  30℃——————15 min
  55℃——————30～60 min
  85℃——————10 min
  4℃

3．反转录所得的cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20℃。

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货号	名称	规格
SV0105	BbvI限制性内切酶	1500U|300U|150U
SV0310	DraI限制性内切酶	10KU|5KU|1KU
SV0433	Hpy188III限制性内切酶	2500U|500U
SV0535	NheI限制性内切酶	5KU|5KU|1KU|500U
SV0561	NruI限制性内切酶	5KU|5KU|1KU|1KU|500U
SV0584	PciI限制性内切酶	1KU|200U
SV0639	RsaI限制性内切酶	5KU|1KU|500U

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名称：Taq DNA聚合酶
货号：BTN51206
规格：500U
本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸，分子量为94 Kd。该酶可以广泛用于PCR，RT-PCR，加尾反应等。

产品特点：
1．耐热DNA聚合活性，该酶在90℃以上几乎无DNA合成，在75～80℃时延伸率约150个核苷酸，70℃时为60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒。在65～68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2．热稳定，在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
3．Mg2+离子依赖性，MgCl2浓度在2.0mM时该酶催化活性zuì高。
4．本酶无3′→5′外切活性，不具3′→5′校对功能，碱基错配机率为2.1×10^-4。

产品组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	20μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	1ml
MgCl2，25mM	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)

1．按下列组份配制PCR反应液。

Taq DNA聚合酶(5U/μl)	0.25μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	5μl
MgCl2(25mM)	根据需要补加
自备dNTP(各2.5mM)	4μl
模板DNA	见下
引物1(20μM)	1μl
引物2(20μM)	1μl
灭菌蒸馏水	Up to 50μl

注：10×PCR Buffer含15mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5mM)，是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500ng
细菌基因组DNA	0.5-50ng
质粒DNA	5-500pg
PCR回收片段	1-100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

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